【干货集锦】|| 通过凝胶电泳打开生物分析的大门

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原理

某物质在电场作用下的迁移速率叫做电泳的速率，电泳的速率与核酸大小和构型有关的，因分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极涌动，分子质量越小跑得越快，紧密构型快于松散型开环分子或线性分子，从而可以分离大小不同的DNA或RNA分子。不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同，在自由涌动时核酸分子的迁移率相对区别很小，难以分开，但采用适当浓度的凝胶戒指作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使得分子大小和构象不同的核酸分子涌动率产生较大的差别，则可达到分离的目的。

一般有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳A、 琼脂糖是一种线性多糖聚合物，可以形成具有刚性的滤孔凝胶，孔隙的大小取决定于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。多用于核酸分离。B、 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳方法，聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好有弹性透明光学性质稳定，对PH和温度变化小，没有吸附和电渗作用小的特点，是一种很好的电泳支持介质。多用于蛋白质分离。

02

实验方法

A、 琼脂糖凝胶电泳的实验方法是，首先制备琼脂糖凝胶，二、制备凝胶板三、加样，四、电泳，五、染色，六、结果观察。B、 聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步骤包括，首先安装电泳槽，二、制备凝胶，三、样品处理与加样，四、电泳，五、离胶与固定，六、染色与脱色。

03

结果与分析

相对迁移率的计算：相对迁移率Mr=蛋白质样品距加样端距离迁移距离/酚蓝区带中心距加样端距离。绘制标准曲线:以每条marker在的相对迁移率为横坐标，相应分子量的对数值为纵坐标，绘制标准曲线。未知蛋白质样品分子量的测算:计算未知蛋白质样品的相对迁移率，在标准曲线上找到对应的纵坐标，即可得到该样品的分子量。

结果初步分析：数量分析：条带的宽度，荧光的亮度质量分析：纯度和分子量影响因素：DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比；琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶电泳中电泳迁移速率不同DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速率差别较大。

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